ABSTRACT
El virus DENV-3 es el responsable del segundo mayor porcentaje de afecciones hemorrágicas severas causadas por este virus, solo superado por el virus DENV-2. La virulencia de este serotipo, causante de brotes epidémicos a gran escala en países como Venezuela donde circula activamente durante todo el año, es la razón principal del desarrollo investigativo en el campo de las interacciones virus-vector en la búsqueda de un control epidémico efectivo. En el presente trabajo, se evaluó la expresión de dos genes, RNAi (dcr-2 y ago-2), que codifican para proteínas de respuesta antiviral en mosquitos con la finalidad de estudiar el cambio en la expresión de los mismos en el vector una vez infectado con el DENV-3. Para ello, se infectó artificialmente una población de Aedes (stegomyia) aegypti de Trujillo, elaborándose dos grupos experimentales (15dpi y 20dpi) y un control; posteriormente se aisló, cuantificó y se realizó transcripción reversa al RNA total aislado de los grupos. La infección en los grupos experimentales se evidenció por la detección de bandas de productos de PCR de 511pb para DENV y 290pb para DENV-3 mediante electroforesis en gel de agarosa al 2%, y se realizó la cuantificación relativa de la expresión genética por PCR en tiempo real. Como resultado, la expresión de los genes no presentó cambios con respecto a los mosquitos no infectados (grupo control) (p<0.05). Estos resultados indican que el virus DENV-3 pudiera estar mostrando mecanismos de evasión sobre las vías de RNAi dentro del cuerpo del vector, y esto puede estar relacionado al hecho de que la replicación de los miembros del genero Flavivirus, entre ellos el DENV, se lleva a cabo en el sistema de membranas y vesículas, lo que les permite evadir el encuentro en el citoplasma con las proteínas asociadas al complejo de RNAi.
DENV-3 is the responsible for the second major percentage of hemorrhagic severe affections caused by this virus, only overcome by DENV-2. The virulence of this serotype is the cause of broad scale fever outbreaks in different countries, especially in Venezuela where it circulates actively throughout the year. This is the main reason of investigative developments in the virus-vector interactions field to find an effective epidemic control. In this study, we evaluated the expression of dcr-2 and ago-2, two RNAi antiviral pathway genes in mosquitoes to study the fold change in the expression of these genes in the mosquito vector Aedes (stegomyia) aegypti infected with DENV-3. We artificially infected a population of mosquitoes from Trujillo state (Venezuela) and prepared three (3) experimental groups (15dpi, 20dpi and a control group). Later, we isolated, quantified and applied a reverse transcription to the total RNA obtained of mosquitoes and the infection in the experimental groups was detected performing a 2% agarose gel electrophoresis of the PCR products of the total RNA (511bp for DENV and 290bp for DENV3). In addition, the infection in the experimental groups was confirmed by the detection of PCR products. The fold change in dcr-2 and ago-2 expression genes was quantify by Real Time PCR. As results, the fold change expression in the ago-2 and dcr-2 were equal to the non-infected mosquitoes control group (p<0.05). These results indicate that DENV-3 could have evasion mechanisms of RNAi pathway inside vectors body, and this can be related to the fact that dengue virus replication is accomplished in the vesicle system and membrane system as well (endoplasmic reticulum and golgi complex) avoiding cytoplasmic encounter with the RNAi pathway proteins.
ABSTRACT
Objetivo: Observar a potencialidade sinantrópica de Anopheles bellator e de An. cruzii em vilarejo rodeado por ambiente natural. Métodos: As observaçöes foram levadas a efeito na localidade de Pedrinhas, no Sudeste do Estado de Säo Paulo, Brasil, de outubro de 1996 a janeiro de 2000. A sinantropia, ou domiciliaçäo, foi estimada pelo índice de Nuorteva (s) acrescido do fator intradomiciliar de Mihályi (d) e adaptado para culicídeos hematófagos. Resultados: Utilizando procedimento baseado na atraçäo pela isca humana, as duas espécies de Kerteszia mostraram freqüência conjunta positiva correspondente a s=35,7. Isso parece indicar a existência de certo grau de sinantropia por parte desses mosquitos. Assim também, a populaçäo de Cx. sacchettae, correspondente à razäo de sinantropia sr=12,8, obtida pelo cálculo da relaçäo entre os dados conseguidos na armadilha de Shannon. Quanto ao método de procura ativa pela aspiraçäo ambiental, os resultados obtidos consistiram em valores negativos de s. Assim, corresponderam a -43,1 para An. bellator, -48,2 para An. cruzii e -3,0 para Cx. sacchettae. Tais cifras foram relacionadas ao valor positivo de s=+93,8 apresentado por Cx. quinquefasciatus e considerado como equivalente a +100,00. Conclusöes: O observado em relaçäo a domicílios isolados rurais repetiu-se em conjunto de casas formando vila, também de caráter rural, e circundada por ambiente primitivo, ou seja, esses mosquitos adultos tendem a procurar o ambiente antrópico na busca de repasto sangüíneo. Uma vez tendo-o conseguido, voltam para o ambiente de onde saíram. Todavia, revelou-se alguma tendência adaptativa revelada pelo encontro de formas imaturas de An. bellator em recipientes artificiais. Quanto a Cx. sacchettae, a populaçäo local parece mostrar tendência para adaptaçäo ao meio antrópico
Subject(s)
Culex , Disease Vectors , Anopheles , BrazilABSTRACT
Objetivo: Observar e comparar o comportamento das espécies de Aedes albopictus e de Ae. scapularis, na localidade de Pedrinhas, litoral sul do Estado de Säo Paulo, Brasil. Métodos: As observaçöes foram feitas de outubro de 1996 a janeiro de 2000. Foram realizadas coletas sistemáticas de formas adultas mediante a utilizaçäo de isca humana, aspiraçöes ambientais e armadilha tipo Shannon. A domiciliaçäo foi estimada pelo índice de Nuorteva e pela razäo de sinantropia. Resultados: Foram feitas 87 coletas diurnas, com a obtençäo de 872 adultos fêmeas. As médias de Williams, multiplicadas por 100, foram de 118 e 21 para Ae. albopictus nos horários de 7h às 18h e de 18h às 20h, respectivamente. Quanto a Ae. scapularis, foram de 100 e 106 nos mesmos períodos. Esse último revelou pico de atividade crepuscular vespertina. Na aspiraçäo de abrigos, obteve-se o total de por 1.124 espécimens, dos quais 226 Ae. albopictus e 898 Ae. scapularis. O período janeiro-maio correspondeu ao de maior rendimento para ambos os mosquitos. Quanto à armadilha de Shannon, as coletas realizadas na mata revelaram a ausência de Ae. albopictus. No que concerne à domiciliaçäo, esse último mostrou os maiores valores de índices, enquanto Ae. scapularis revelou comportamento de tipo ubiquista. Conclusöes: Os resultados confirmam outras observaçöes, permitindo levantar hipóteses. Em relaçäo a Ae. scapularis, sugere-se que possa existir fenômeno de diapausa das fêmeas no período veräo-outono, a qual cessaria no inverno-primavera quando entäo a atividade seria retomada. Quanto a Ae. albopictus, os dados sugerem que se trata de populaçäo em processo adaptativo ao novo ambiente
Subject(s)
Animals , Aedes , Disease Vectors , Insect Vectors , CulicidaeABSTRACT
Objetivo: No período de 1996 a 1999, um agente viral causador de encefalomielite afetou as populaçöes de eqüinos em diferentes regiöes do Estado do Paraná, Brasil. Objetivou-se realizar pesquisa sorológica na tentativa de isolar o vírus causador da doença. Métodos: Em quatro municípios do Estado do Paraná, Brasil, foram coletados culicídeos com armadilha Shannon e isca humana, identificados e processados para isolamento de vírus. Em dois municípios estudados foram colhidas amostras de sangue de eqüinos para isolamento de vírus e para pesquisa sorológica. Os soros foram analisados pelo teste de inibiçäo da hemaglutinaçäo frente a diferentes antígenos de Alphavirus e Flavivirus. Aqueles que revelaram reaçöes positivas-cruzadas foram analisados pelo teste de neutralizaçäo. Resultados: Foram coletados culicídeos dos gêneros: Culex, Aedes, Mansonia, Coquillettidia, Psorophora, Sabethes, Wyeomyia e Limatus. Embora näo sendo isolado o agente viral, foram detectados anticorpos hemaglutinantes para o vírus Encefalomielite eqüina do Leste, Mucambo, Pixuna, Maguari e St. Luis. Em doze amostras de soros foram detectados anticorpos neutralizantes para o vírus Encefalomielite eqüina do Leste. Conclusöes: Foram coletadas espécies de culicídeos, considerados na bibliografia como vetores de vírus causadores de encefalomielite buniavírus e outras arboviroses de importância epidemiológica. Pela presença de sintomas de encefalomielite e de anticorpos para o vírus Encefalomielite eqüina do Leste nos soros de cavalos, supöe-se ser esse o vírus causador da doença nos eqüinos das regiöes estudadas